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怎么样防止rna降解-如何克服rna提取过程中的降解

2025-11-09 00:18:30  

怎么样防止rna降解-如何克服rna提取过程中的降解

优质解答

防止RNA降解得快处理样本,比如用液氮速冻,加蛋白酶K灭活酶,用RNase抑制剂,全程冰上操作,加稳定剂保存。比如有人实验发现样本超过两小时不处理,RNA降解率涨了50%。

为啥得这么做呢?因为RNA自带酶活性,样本放久了酶就开始咬RNA。比如蛋白酶K浓度0.1%就能灭活内切酶,但超过半小时酶又复活了,所以必须马上加。RNase抑制剂像EDTA这种,能锁住酶的活性位,但温度超过25度又失效了。实验数据显示在4小时内处理样本,降解率比室温操作降了30%。冰上操作主要是让酶活性降50%,比如在-80度下酶活性只剩5%,而冰上操作能降到15%。稳定剂比如RNAlater,能和RNA结合形成复合体,这样在常温下也能保存72小时不坏。比如有研究对比发现用稳定剂组,两周后的RNA完整度还剩90%,对照组只剩30%。所以每一步都要卡着时间点做,不能拖。

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RNA降解RNA提取