2025-11-09 00:19:48
胰酶消化细胞就像煮鸡蛋,温度越高消化越快,所以第一步要冰一下,把温度降到4℃以下,这样酶就停止工作啦。然后马上加终止液,终止液里有EDTA和Tris,EDTA能绑住钙离子,钙离子是胰酶启动的钥匙,绑住了酶就动不了啦。用清水多冲几遍,把残留的终止液冲干净,细胞就能活过来啦。
冰一下为什么要这么急呀?因为胰酶有个特性,温度每升高1℃,活性就翻倍。实验证明,4℃冰浴5分钟,胰酶活性下降90%以上,这时候赶紧加终止液,EDTA浓度只要达到10mM就能完全阻断钙离子结合,而终止液pH调到7.4,正好卡住胰酶的活性位点。有个研究说,如果等15分钟才终止,细胞存活率会从95%掉到70%。就像煮鸡蛋加水多放点,蛋白就凝固得快,所以动作要快准狠,不能拖泥带水。不过要注意终止液不能多加,否则会把细胞也泡死,得按说明书比例来。冲水的时候要轻轻按摩,别把细胞冲散了。
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