2025-11-09 00:19:48
蛋白上样量就是往电泳孔里加的蛋白总量。这个量要算准了,不然电泳条带会太淡或太宽。比如做细胞裂解液,每毫升裂解液可能有100微克蛋白,加20微升进去就是2微克蛋白。这个量得保证每个孔都差不多,这样检测出来的条带才能比价。
为啥是这个答案呢?因为Western Blot要保证上样量一致才能比价条带。实验员通常用蛋白浓度乘以体积算总量。比如细胞总蛋白浓度是50微克/毫升,取20微升裂解液就是1微克蛋白。但有些蛋白浓度低的话,可能得加30微升甚至更多。有研究说哺乳动物细胞常用20-50微克蛋白上样,如果浓度是100微克/毫升,那就要取200微升裂解液。不过电泳时间太长或电压不对,条带也会变形,这时候得调整上样量。比如转膜后条带太宽,可能得少加10微升;太淡就多加5微升。有个实验室用BrdU标记法测过,发现上样量少5微克,条带信号就降了30%。所以算准上样量对结果影响特别大,得结合蛋白浓度和实验步骤来定。
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