冻存悬浮细胞主要分三步走，首先得用液氮罐保存，中间要加DMSO这种防冻剂，装进冻存管速冻。具体操作是取细胞悬液，按每管50到100微升分装，加10%体积的DMSO混匀，然后放-80℃冰箱冻10分钟再转液氮罐，长期保存。

为啥要这么弄呢？因为悬浮细胞像小气球，冻的时候容易结冰晶把细胞膜戳破。实验数据显示，分装量少于一微升容易结冰，超过200微升冻不透。DMSO浓度低于5%冻不牢，高于15%会毒死细胞，10%最安全。速冻时间太短细胞会"抽水"，超过20分钟冰晶太大。液氮保存比-80℃好十倍，数据说液氮里存三年活性还剩80%，而-80℃只能存半年。复苏时解冻要慢，用37℃水浴5分钟，这样细胞才能"缓过来"。