2025-11-09 00:21:49
这个实验里加了溶菌酶和溶液ii,细菌裂开变黏糊糊的,离心后上清液浑浊沉淀。溶菌酶先让细菌细胞壁破开,溶液ii再溶解细胞膜,质粒DNA就浮到溶液里了。离心的时候上清液像泥水一样,底部有白色颗粒,这就是DNA。
你看啊,溶菌酶浓度高容易让细菌细胞壁断断续续,如果浓度不够0.1mg/ml的话,裂解不完全,残留细胞碎片会把DNA缠住。溶液ii的pH8.0和0.15M NaCl能溶解细胞膜脂质,但浓度太低(比如0.1M)就洗不干净,残留的膜结构会让DNA结块。实验数据说离心8000rpm转10分钟,沉淀的DNA浓度能到200ng/μL,但时间不够(比如转5分钟)的话,细胞碎片还漂在上清里。上次有个同学加溶菌酶多放了两分钟,结果DNA断成小片段,测出来的浓度才80ng/μL。所以步骤顺序和浓度控制特别重要,就像煮鸡蛋要先开水下锅再计时,火候差一秒都出问题。离心后的上清浑浊像泥水样,底部白色颗粒用离心管夹子夹起来,再用溶液iii洗两遍,DNA就纯了。
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