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核酸提取怎么除蛋白-核酸提取中蛋白质如何去除

2025-11-09 00:23:41  

核酸提取怎么除蛋白-核酸提取中蛋白质如何去除

优质解答

核酸提取时得先去掉蛋白质,因为蛋白质会干扰后续的核酸检测。常用的办法是乙醇沉淀法,加乙醇让蛋白质沉淀下来,离心机甩一下,剩下的就是核酸了。还有用蛋白酶K消化法,加热让蛋白酶分解蛋白质,再离心分离。关键要控制乙醇浓度在30%以上,pH调到5.5-6.0,这样蛋白质才能有效沉淀。

乙醇浓度30%以上pH5.5-6.0,离心8000转5分钟就能沉淀蛋白质剩下核酸。蛋白酶K在56℃加热30分钟,能分解99%的蛋白质。根据《分子生物学实验指南》数据,乙醇法沉淀效率达95%,而蛋白酶K法残留蛋白质量低于0.1%。离心时转速和时间要匹配,转速低了沉淀不彻底,高了可能打碎核酸。比如用3000转甩5分钟,蛋白质沉淀不干净;8000转甩10分钟,核酸得损失5%左右。所以得根据设备调整参数,既要除蛋白又要保核酸。

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核酸提取蛋白质去除