2025-11-09 00:30:26
琼脂糖电泳配制要先用琼脂糖粉加水煮沸然后冷却到合适温度再加样每个样品加1-2微升用牙签挑破胶孔。琼脂糖浓度一般是0.8%-1.2%之间,具体看电泳时间,浓度越高跑得越慢浓度越低跑得越快。加样量不能太多也不能太少,太多会挤占隔壁孔位,太少样品扩散不开。
为什么是这个量呢因为琼脂糖浓度影响电泳速度浓度过高胶太硬样品跑不动浓度过低胶太软样品容易断比如1%的胶常用浓度0.8-1.2%之间每个孔加1-2微升能保证样品扩散均匀避免重叠如果加太多会挤占其他孔加太少可能扩散不好影响结果。实验数据显示当琼脂糖浓度在1%时电泳时间约30-60分钟,此时加样量1-2微升正好让DNA片段在胶孔里均匀分布。比如用1%琼脂糖凝胶检测2000bp的DNA片段,加样1微升时条带清晰可见,加样超过3微升时条带会变得模糊甚至断裂。时间上要等琼脂糖溶液冷却到60度左右再加样,这时候胶还没完全凝固还能用牙签挑破孔洞。
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