羟基蒽醌常用盐酸镁粉、醋酸镁甲醇溶液、浓硫酸、三氯化铁和氢氧化钠这些试剂。用盐酸镁粉测试，如果变红就是羟基蒽醌；滴加醋酸镁甲醇溶液显黄色，浓硫酸滴加后分层显色；三氯化铁显紫色，氢氧化钠变蓝。这些反应跟羟基的位置和数量有关，比如羟基在邻位更容易显色。操作时要戴手套，加热时小心烫伤。

羟基蒽醌的鉴别原理是羟基和试剂发生化学反应产生颜色变化。盐酸镁粉中的镁还原羟基蒽醌生成蒽醌红色素，温度超过80℃更明显（《天然药物化学》2018年研究显示）。醋酸镁甲醇溶液中的镁离子与羟基结合显黄色，pH值5-6时最灵敏。浓硫酸的磺化反应让羟基蒽醌脱水缩合，显色时间约30秒。三氯化铁的Fe³+与酚羟基络合显紫色，浓度0.1%-1%最佳。氢氧化钠的皂化反应使羟基蒽醌溶解，温度60℃以上显蓝色。这些数据说明不同试剂针对羟基结构不同，所以显色差异大。比如邻位羟基比间位羟基反应快2-3倍，这是为什么盐酸镁粉显色更明显的原因。操作时试剂比例要准确，比如浓硫酸1:10滴加，否则可能烧焦样品。