荧光染料是自带"夜光"的分子，它们吃光后吐出不同颜色的光，颜色越深波长越短。测发射波长就像用分光镜看彩虹，把染料放在仪器里，用已知波长的光照射，等它发光后慢慢转动镜子，找到最亮的地方就是它的发射波长。比如罗丹明6G吃435nm蓝光，会吐出590nm橙光，仪器会自动记录这个数值。

为什么得这么测呢？因为荧光染料吃光吐光的过程有固定规律，吃光波长叫激发波长，吐光波长叫发射波长，两者差值约50-100nm。实验时得用分光光度计，这个仪器有单色器、样品室、检测器三块拼图。单色器像棱镜，把复合光拆成单色光，样品室放染料，检测器算强度。比如测罗丹明6G时，先调激发光到435nm，仪器转镜找到590nm时检测器数值最大，说明这就是发射波长。不同染料吃吐光不同，比如DAPI吃354nm吐488nm，所以测法必须对应具体染料。数据来自《分子细胞生物学实验手册》和Thermo Fisher分光光度计说明书，误差不超过±5nm。