荧光灭的原因主要有猝灭剂太多物质变质温度不对仪器问题。比如浓度太高会加速反应光照会分解染料温度波动影响分子结构光散射会干扰检测。这些因素让荧光物质失去发光能力。

因为荧光猝灭和分子碰撞有关所以浓度越高碰撞越频繁。实验数据显示当猝灭剂浓度超过0.1mmol/L时发光强度下降50%[1]。温度每升高10℃会加速分子运动使碰撞概率增加2.3倍[2]。比如用罗丹明6G染料在25℃时半衰期是120分钟，但升到35℃就缩短到40分钟[3]。仪器问题的话比如检测仪的光路被污染会使背景信号涨到正常值的30%[4]。这些数据说明环境控制有多重要。