稀释菌落总数要先用生理盐水按比例稀释样品，比如第一次加九倍生理盐水混匀，第二次再加一倍生理盐水，直到稀释到10^-6到10^-3之间。涂布到平板后培养三天，数够30到300个菌落就能算出总数。

为什么这样做呢？因为国标规定菌落总数计数需在稀释倍数10^-6到10^-3之间，这样涂布平板的菌落数才不会太多或太少。比如稀释到10^-6时可能只有几个菌落，而10^-3时可能超过300个，都不符合标准。实验数据显示，当稀释倍数在10^-5到10^-4时，涂布平板的菌落数刚好落在30-300之间，这时候算出的菌落总数误差最小。比如某次实验用10^-5稀释后涂布，平均每皿有45个菌落，换算成每克样品的菌落总数就是4500±200CFU/g。而如果稀释倍数不对，比如10^-4时可能只有15个菌落，换算出来的数值就会偏低。所以必须严格按照稀释梯度操作，涂布后培养三天，数够标准范围内的菌落才能准确计算。