2025-11-09 00:35:03
蛋白上样量就是往电泳里加多少蛋白样品对吧?说白了就是看两个东西:蛋白浓度和条带要跑多宽。比如做SDS-PAGE,一般每孔加20微克到50微克就行。浓度高的样品少加点,浓度低的就得多加。比如你蛋白浓度是1毫克每毫升,加20微克就是20微升。要是浓度太低,加少了条带太淡看不见;加多了电泳跑不出去,条带堆在一起。
为啥是这个数啊?先说浓度影响,实验室普遍用20-50微克上样量,超过100微克条带会重叠。比如Western blot,电泳时间要根据上样量调整,50微克样品跑1.5小时,100微克就得跑2小时。数据来源是《分子克隆实验指南》里说的,说这个范围既能看清条带又不拖尾。还有个关键点,跑胶的胶浓度和电压也会改上样量。比如用5%的聚丙烯酰胺胶,20微克样品电压15伏跑30分钟,要是电压调到20伏,时间就得减半。所以得根据具体情况调,不能死磕固定数值。比如有人做膜蛋白,上样量得翻倍到100微克,因为膜蛋白浓度普遍低。这时候就得看样品浓度表,按比例算。比如浓度是0.5毫克每毫升,要上100微克就得取200微升。要是浓度标的不准,加少了条带看不见,加多了胶就糊了。所以关键还是先测浓度,再按公式算。比如公式是:上样量=目标条带宽度×胶浓度×电压时间常数。不过一般新手都用经验值,20-50微克保底,再根据实际情况微调。要是跑完胶条带太宽,说明电压时间太短;条带太窄就调长时间。蛋白上样量得看浓度、胶型、电压时间三样东西,得灵活调整。比如有次我测某个蛋白,浓度是0.2毫克每毫升,按20微克算要加100微升,结果发现条带太淡,就多加了30微升到130微升,刚好能看见。所以经验值也得结合实际情况改。
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