2025-11-09 00:35:04
要算蛋白的大小,一般有三种办法。第一种是看质谱仪测出来的精确分子量,比如用液质联用仪测的话,能精确到小数点后一位道尔顿。第二种是跑SDS-PAGE电泳,拿已知分子量的蛋白标准品当参照,比如常用的预染蛋白标有5千道尔顿、10千道尔顿这些刻度。第三种是测溶液的粘度变化,不过这个方法现在用得少了。
为啥得用这三种方法呢?首先得说SDS-PAGE的原理,电泳时蛋白会变直,电荷被SDS包裹,所以大小和条带位置成正比。根据2018年《生物化学方法》的数据,SDS-PAGE测20千道尔顿以上的蛋白误差不超过15%,但小于5千道尔顿的误差会变到30%。比如测一个5千道尔顿的蛋白,条带跑在标准品5k和10k之间,实际可能就是6.5千道尔顿左右。而质谱法更准,像Orbitrap仪器测的误差能控制在0.1%以内,但设备贵得要命。粘度法虽然便宜,但受温度和浓度影响大,现在基本被淘汰了。所以要根据预算和精度需求选方法,比如学生实验常用SDS-PAGE配标准品,企业研发才上质谱。
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