革兰氏染色液要配四样东西结晶紫、碘液、酒精和沙黄。结晶紫和碘液各取一份混合，酒精两份加到前面混合液中，再加一份沙黄。涂片染色时先滴结晶紫，过碘液，再用酒精擦洗脱色，滴沙黄看结果。

革兰氏染色液配成这样是因为结晶紫和碘液能固定细菌颜色，酒精能洗掉不牢固的紫色。比如革兰氏阳性菌细胞壁厚，酒精洗不净，紫色就留着；阴性菌细胞壁薄，酒精洗掉紫色，沙黄就显红色。数据说酒精浓度75%时脱色效果最好，时间控制在10秒内，超过就会把两种菌都染成红色。涂片前要等酒精擦洗完再滴沙黄，否则沙黄会冲掉碘液形成的复合物。比如用0.5%结晶紫配0.5%碘液，2%酒精，0.5%沙黄，混合后涂片成功率可达90%以上。