装柱子前先用甲醇把柱子泡一遍，这样能洗掉柱子上的残留物。接好管子后先加水，再慢慢加甲醇，比例从30%升到100%分三次加。每次换溶剂都要等柱子平衡半小时以上。用纯水洗三次，每次半小时，这样柱子就冲好了。

为什么这么冲呢？甲醇能溶解柱子里的残留蛋白和填料，柱效提高30%（数据来源：J Chromatogr A 2022）。先用水冲能带走甲醇残留，避免峰拖尾。分三次换溶剂是因为突然浓度变化会压坏填料，平衡半小时让填料颗粒重新排列。纯水洗三次是因为残留的有机物会影响分离度，比如用30%甲醇冲完直接上样，分离度会下降15%（数据来源：Analytical Chemistry 2021）。冲柱子后柱效能从5000理论塔板提升到6500，柱压从15MPa降到8MPa，这样下次分析峰形会更对称。